痢疾结合疫苗LPS制备条件的优化研究

通过对痢疾杆菌LPS提取过程中主要制备环节的优化和改进,确立最佳提取条件和纯化过程,并应用优化后的工艺路线分别制备八批次福氏2 a痢疾杆菌和宋内氏痢疾杆菌LPS;福氏2 a痢疾杆菌LPS批平均产量为1.633g,宋内氏痢疾杆菌LPS批产量平均为1.251g,批产量相对稳定,平均产量比优化改进前提高20%以上。LPS经过酸水解、柱层析纯化获得目标O-SP,福氏2 a痢疾杆菌和宋内氏痢疾杆菌O-SP的得率分别为20%和28%。检测结果证明,LPS和O-SP各项指标均符合规程(草案)相关要求。实验为今后痢疾结合疫苗大规模制备工艺的改进和提高打下了基础。     

重组铜绿假单胞菌外毒素A工程菌的高密度发酵与表达

高密度培养表达大肠杆菌生产重组铜绿假单胞菌外毒素A(rEPA)。用上海高机公司的30L自控发酵罐,采用分批补料培养技术,维持葡萄糖的浓度始终处于较低的水平,并分批补加氮源,同时溶氧控制在30%～40%,pH自动调控至7.0,培养至对数中期进行诱导。重组菌最终发酵液光密度(A600)未诱导时达到44,诱导时达到36,在上清液中表达的rEPA蛋白的含量占总蛋白的28.1%,在菌体中表达蛋白含量占总蛋白的4.7%。本实验为rE-PA的大规模生产奠定了基础。     

新生儿凝固酶阴性葡萄球菌败血症血降钙素原、C反应蛋白、白细胞及血小板计数变化及其意义

目的观察新生儿凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)败血症患儿血降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、白细胞(WBC)及血小板(PLT)水平的变化,探讨其与新生儿CNS败血症的关系。方法选择2013年至2014年住院的新生儿CNS败血症患儿38例作为观察组,另选同时期收住无感染症状的32例新生儿为对照组,比较两组患儿入院后血PCT、CRP、WBC及PLT水平和阳性率的差异,并观察这些指标诊断新生儿CNS败血症灵敏度和特异度。结果观察组PCT水平、阳性率显著高于对照组(P0.05),两组患儿CRP、WBC、PLT水平及阳性率比较差异无统计学意义(P0.05),PCT诊断新生儿CNS败血症灵敏度高于CRP、WBC及PLT,但特异度低于后三者。结论新生儿CNS败血症无特异性实验室检查方法,PCT对新生儿CNS败血症早期诊断有一定的价值,联合检测PCT、CRP、WBC及PLT能提高诊断的准确率,血培养阳性仍是诊断新生儿CNS败血症的金标准。     

紫杉醇生物合成途径及调控研究进展

本文综述了紫杉醇的生物合成途径、代谢调控及基因工程方面的研究进展,总结了代谢调控与基因工程方法提高红豆杉属植物细胞培养紫杉醇合成量的研究状况,并在探讨生物合成途径理论的基础上,对紫杉醇生物合成的限速步骤进行了阐述,指出解决侧链合成的根速步骤问题会显著提高紫杉醇的生物合成量。     

酵母脯氨酸合成酶基因(Pro2)的分离及Leu~+ Pro~+表型共转导

酵母7209-1 A(a)DNA,用pHC79为载体,以BamHⅠ、PstⅠ和Hind Ⅲ酶切,经体外重组和包装后,转导至大肠杆菌HB101和SC294中。在我们的实验条件下(对酵母DNA适度酶解,F/V值为15,连接时DNA总浓度为200—250微克/微升以及BHB 2688/BHB2690比值为5),重组建库效率达到10~6CFU/微克载体DNA,重组子双抗值降低到10％或5％以下。 大肠杆菌HB101和SC 294的10~6个重组体克隆中,观察到酵母基因对leuB 6及proA2(在HB101中),leu6,metB1,argG,his1(在SC294中)等营养缺陷型的互补(校正)效应。由于互补频率(10~(-3)—10~(-4))比上述基因突变自发回复率高2—3个数量级,因此可以说,酵母的上述基因在大肠杆菌中获得了功能表达。对pYeleu5和pYeleu7单克隆DNA的再次包装转导和再次互补测试表明,我们已使酵母leu~+的互补效率提高10~4倍。本文还报道了在HB101中的酵母基因文库Leu~+ Pro~+的表型共转导现象,频率为30％以上。     

WEB2基因在酿酒酵母S期检查点通路上调控RNR3基因表达

WEB2基因参与酿酒酵母S期检查点调控机制,而RNR3基因位于该调控通路末端,DNA损伤或合成阻断时,S期检查点通路诱导RNR3过度表达。因此,通过确定WEB2在该检查点通路上是否参与调控RNR3基因的表达,将有助于进一步明确WEB2基因在检查点通路上的工作位点,了解WEB2基因如何发挥检查点调控功能。构建RNR3-LacZ基因融合质粒,用于检测酵母细胞内RNR3基因的诱导性。诱导性可以通过测定β-半乳糖苷酶的活性而得知。利用DNA损伤药物甲磺酸甲酯(MMS)及DNA合成阻断剂羟基脲(HU)处理酵母细胞,测定WEB2基因突变株和野生株细胞内RNR3基因的诱导性。结果,WEB2突变株细胞中诱导活性分别增加(8.27±0.38)倍和(9.55±0.24)倍,而野生株分别增加了(83.32±2.42)倍和(124.67±2.87)倍。反映RNR3基因在WEB2突变株中的诱导性低于野生株。同RAD53突变株相比,后者的RNR3基因的诱导性更低,仅为(2.37±0.18)倍和(2.91±0.13)倍。说明WEB2基因突变影响S期检查点通路的信号传递至RNR3基因,所以在酿酒酵母S期检查点通路上,WEB2工作在RNR3基因上游,参与调控RNR3的表达,但调控能力不如RAD53基因强。     

盐胁迫下唐古特白刺对外源Ca2+的生理响应

为探讨Ca2+与盐生植物耐盐性的关系,以唐古特白刺(Nitraria tangutorum)为试验材料,研究不同浓度外源Ca2+对盐胁迫下唐古特白刺的生理响应,结果表明,盐浓度不高于300 mmol·L-1时,施加定浓度Ca2+(≤15 mmol·L-1)可增加唐古特白刺叶片相对含水量,提高叶片水势与根系活力,降低电解质外渗率,减少MDA含量,增加脯氨酸的积累,同时提高SOD和POD活性,且这种趋势随Ca2+浓度的增加而增加。而高浓度Ca2+(>15 mmol·L-1)对唐古特白刺各生理指标均表现出不同程度的抑制作用,影响唐古特白刺的正常代谢活动。说明定浓度的Ca2+(≤15 mmol·L-1)能有效缓解盐胁迫(NaCl≤300mmol·L-1)对唐古特白刺造成的伤害,高盐胁迫下外施Ca2+缓解作用不明显,甚至表现为抑制作用。     

中国短桨蟹属（十足目，短尾次日，梭子蟹科）二新种

记述梭子蟹科Portunidae,短桨蟹属 Thalamita 2新种,即刺肢短桨蟹T.acanthophallus和西沙短桨蟹T．xishaensis。 刺肢短桨蟹,新种T.acanthophallus sp．nov．（图1～8） 在整体形态上,新种最相似于T.danae Stimpson,1858,T.multispinosa Stephcnson ＆ Rees, 1967,and T. holthuisi Stephenson,1975。新种与后3种的区别在于：新种头胸甲只有4枚前侧缘,而后3种具5齿,而;雄性腹部第6节明显短于其它3种;雄性第1腹肢形态与后3种明显不同. 词源：新种种名acanthophallus来源于希腊文,意指繁殖器官雄性第1腹肢末部具众多刺。 西沙短桨蟹,新种T.xishaensis sp．nov．（图9—16） 新种最相似于T.nanshaensis Dai,Cai＆Yang,1996,and T.wakensis Edmondson,1925。但新种与T.nanshaensis Dai,CaiZ（Yang,1996,在头胸甲上的颗粒分布,螯足、第3颚足、雄性腹部及雄性第1腹肢的形态等均有明显差异。新种与T.wakensis的区别主要在于额齿、头胸甲前侧齿的形态,以及游泳足前节后缘的齿数。 词源：新种种名意指模式标本产地。 模式标本采自南中国海西沙群岛,并保存在中国科学院海洋研究所。     

O1/O139新型霍乱疫苗口服免疫动物后的自动免疫保护及被动保护试验研究

O1／O139霍乱口服疫苗是一种新型疫苗。本文通过2种不同途径免疫动物,检测血清抗菌抗体和肠道分泌性IgA抗体以及保护力试验,并探讨了它们之间的关系。通过家兔肠袢试验和细胞四甲基偶氮唑盐(MTT)试验检测免疫后抗血清的被动保护作用。试验提示：在霍乱的保护性免疫应答中,除粘膜免疫可能占主导作用外,血清抗菌抗体也发挥了一定的作用。     

盐胁迫下唐古特白刺对外源Ca2＋的生理响应

为探讨Ca2＋与盐生植物耐盐性的关系,以唐古特白刺（Nitrariatangutorum）为试验材料,研究不同浓度外源C矛’对盐胁迫下唐古特白刺的生理响应,结果表明,盐浓度不高于300mmol·L-1时,施加一定浓度Ca2＋（≤15mmol·L-1）可增加唐古特白刺叶片相对含水量,提高叶片水势与根系活力,降低电解质外渗率,减少MDA含量,增加脯氨酸的积累,同时提高SOD和POD活性,且这种趋势随Ca2＋浓度的增加而增加。而高浓度Ca2＋（〉15mmol·L-1）对唐古特白刺各生理指标均表现出不同程度的抑制作用,影响唐古特白刺的正常代谢活动。说明一定浓度的Ca2＋（≤15mmol·L-1）能有效缓解盐胁迫（NaCI≤300mmol·L-1）对唐古特白刺造成的伤害,高盐胁迫下外施Ca2＋缓解作用不明显,甚至表现为抑制作用。